NIBSC 百日咳杆菌抗FHA血清(标准品)

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非 WHO 参考材料

百日咳博德特氏菌抗 FHA 血清（绵羊）

NIBSC 97/564

本材料不适用于体外诊断。

1. 预期用途

在绵羊中制备抗血清以纯化百日咳博德特氏菌丝状血凝素并用于无细胞百日咳疫苗的对照测试。

2. 注意

该制剂不适用于人类食物链中的人类或动物。

该材料不是人或牛来源。与所有生物来源的材料一样，这种制剂应被视为对健康有潜在危害。应根据您自己实验室的安全程序使用和丢弃它。此类安全程序应包括戴防护手套和避免产生气溶胶。打开安瓿或小瓶时应小心谨慎，以免割伤。

NIBSC 97/564 百日咳杆菌抗FHA血清(标准品)

3. 单元

没有为该材料分配单元

4. 内容

生物材料原产国：英国。

每个小瓶含有 1.0ml 0.01M 磷酸钾 pH7.2、0.5M NaCl 溶液的冻干残余物，该溶液含有通过用 50% 饱和硫酸铵沉淀抗百日咳杆菌 FHA 血清而纯化的免疫球蛋白。

5. 存储

未开封的小瓶应储存在 -20°C。

请注意：由于冻干材料固有的稳定性，NIBSC 可能会在环境温度下运输这些材料。

6. 开瓶指南

样品瓶有一个“上翻式"圆形瓶盖。无论是在瓶盖上还是在小瓶的套环上，都标有撬开瓶盖的位置。这暴露了塞子的一个区域，通过该区域重构可以使用皮下注射针头和注射器提取制剂。如果首先 使用移液器，则使用镊子等*取下金属项圈，戴上合适的手套注意避免割伤。取下塞子以便进入。应注意防止内容物丢失。

NIBSC 97/564 百日咳杆菌抗FHA血清(标准品)

7. 材料的使用

出于实用目的，每个小瓶都含有相同数量的抗血清。每个小瓶的全部内容物应*重新悬浮在准确测量量的水或缓冲溶液中。不应试图权衡其中的比例冻干粉。

如果不立即使用，建议将悬浮液储存在 –20°C 或以下。应避免反复冻融。小瓶不含抑菌剂，不应假定制剂是无菌的。

用于绵羊免疫的抗原是纯化的丝状血凝素，它是由比利时 Rixensart 的 SmithKline Beecham Pharmaceuticals 通过 M Duchene 博士的斡旋慷慨捐赠的。用弗氏*佐剂 (FCA) 乳化的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中的一剂 250µg 抗原 (PBS) 以 2ml 的总体积肌肉注射给绵羊，然后每隔 4 周注射三剂 150µg 抗原。最后一次注射后 2 周进行终末放血。通过用50％饱和硫酸铵沉淀免疫球蛋白来部分纯化血清。

将沉淀物重新悬浮在PBS中并将悬浮液以1ml等分试样分配到小瓶中并冻干。通过ELISA检查抗血清对同源抗原的反应性和与其他百日咳抗原的交叉反应。在 1/10,000 的稀释度下，抗血清给出了同源滴度，并且与其他百日咳抗原没有交叉反应。

酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）
五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。